等溫滴定量熱法是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種研究生物熱力學(xué)與生物動(dòng)力學(xué)的重要方法，它通過(guò)高靈敏度、高自動(dòng)化的微反應量熱儀連續、準確地監測和記錄一個(gè)變化過(guò)程的量熱曲線(xiàn)，原位、在線(xiàn)和無(wú)損傷地同時(shí)提供熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)信息。
在使用過(guò)程中會(huì )出現基線(xiàn)位置變化的問(wèn)題，在這里整理了會(huì )影響基線(xiàn)位置的一些主要因素，
1、在安裝ITC儀器時(shí)，避免安裝在陽(yáng)光直射的位置，以免導致長(cháng)時(shí)間的陽(yáng)光直射造成溫度沿滴定針傳導至樣品池，造成基線(xiàn)的漂移。
2、在安裝ITC儀器時(shí)，不要安裝空調口直吹的位置，以免導致長(cháng)時(shí)間空調直吹造成溫度沿滴定針傳導至樣品池，造成基線(xiàn)的漂移。
3、人為操作的不小心，如滴定針不小心被碰彎了(經(jīng)常發(fā)生，當滴定針?lè )旁赗est Position的時(shí)候，但是很多情況不容易發(fā)現)，彎曲的滴定針有可能在滴定時(shí)持續摩擦樣品池側壁，造成樣品池溫度升高。
4、安裝的不到位或者固定的螺栓松了。在更換滴定針后滴定針有可能安裝不到位(露出Pipette底部的玻璃針管過(guò)長(cháng))或者長(cháng)時(shí)間使用后固定滴定針的螺栓發(fā)生松動(dòng)導致滴定針下沉，可能導致滴定時(shí)由于滴定針過(guò)長(cháng)摩擦樣品池底部，造成樣品池溫度升高。
5、攪拌速率的影響。不同的攪拌速率會(huì )帶來(lái)不同的熱量釋放(攪拌速率越高，溫度越高，基線(xiàn)越低，反之亦然。)。一般在ITC實(shí)驗中，我們都設置的是恒定的攪拌速率，一般不會(huì )由于攪拌速率改變造成基線(xiàn)的變化。但在某些Pipette故障或者樣品粘度較高造成攪拌器轉動(dòng)不均時(shí)，可能會(huì )導致樣品池熱量的變化。
6、樣品池中有氣泡。這個(gè)現象可能是最為常見(jiàn)的影響初始基線(xiàn)位置的原因了。樣品溫度、加樣技巧等都可能對基線(xiàn)有影響。當樣品池中存在由于加樣或者樣品因溫度差脫氣造成的小氣泡時(shí)(由于水的比熱容要比空氣大，氣泡占據了水分子的位置導致樣品池中整體比熱容下降)，在給樣品池施加與參考池相同的功率時(shí)，樣品池的溫度會(huì )比參考池稍高，進(jìn)而使傳感器“誤認為”樣品池更熱，從而減少給樣品池的功率，造成基線(xiàn)下降。在出色的操作技巧下，實(shí)際的初始基線(xiàn)一般和設定的Reference Power相差0.1ucal/s左右，當然，一般情況下，±1 ucal/s的初始基線(xiàn)位置偏離一般是可以接受的。有一個(gè)需要注意的問(wèn)題是，當操作含有Detergent(如Triton X100, NP40等)的膜蛋白樣品時(shí)，建議小心的一次加樣完成，不建議通過(guò)吸打的方式排出氣泡，這樣可能會(huì )使問(wèn)題更加嚴重
7、參考池中有氣泡。這個(gè)現象與上面描述的現象正好相反。
8、基線(xiàn)呈階梯狀下降。 當滴定針中僅有空氣或者沒(méi)有*充滿(mǎn)樣品時(shí)，在滴定過(guò)程中，隨著(zhù)樣品的注入，樣品池中由于空氣的不斷注入導致樣品池的比熱容一直在降低，導致基線(xiàn)呈階梯狀下降;另一種可能的原因連接滴定針的Fill Port Adaptor (FPA) 磨損造成的，這種情況需要更換新的FPA;在使用ITC研究酶促動(dòng)力學(xué)的過(guò)程中，也會(huì )出現類(lèi)似的現象，可以考慮反應物之間是否存在可能的催化過(guò)程。
9、樣品池中未充滿(mǎn)。 當樣品池沒(méi)有*充滿(mǎn)時(shí)，隨著(zhù)滴定針中反應物的逐漸注入，樣品池逐漸充滿(mǎn)，導致樣品池中的比熱容逐漸提高，導致基線(xiàn)呈階梯狀上升。因此，請加滿(mǎn)280 ul樣品并排出氣泡。
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